Estudo comparativo com diversos fixadores para aplicação em microscopia eletrônica de transmissão / A comparative study on several fixatives applied in transmission electron microscopy procedure

Um estudo comparativo sobre a ação de diversos fixadores utilizados em microscopia eletrônica de transmissão (MET) e microscopia de luz (ML) foi realizado, a fim de analisar a preservação de estruturas celulares ao microscópio eletrônico de transmissão (MET). Fragmentos de fígado de camundongo foram fixados em 5 diferentes fixadores: o fixador de Karnovsky, glutaraldeído e paraformaldeído utilizados no processamento para MET e o formaldeído comercial e líquido de Bouin utilizados no processamento para ML. Após a fixação, os fragmentos foram pós-fixados com tetróxido de ósmio e contrastastados com acetato de uranila. A seguir foram desidratados e incluídos em resina Epon. Os cortes ultrafinos mostraram que os fragmentos fixados com Karnovsky e glutaraldeído apresentaram melhor preservação das estruturas celulares e menor extração. O paraformaldeído produziu alguns artefatos de má fixação e extração pelo fato de formar menos ligações cruzadas que o glutaraldeído. Os fixadores formaldeído comercial e o líquido de Bouin utilizados em microscopia de luz mostraram que não são adequados ao uso em MET, pois são considerados fixadores coagulantes e produzem extensa extração dos componentes celulares. Comparando-se as imagens obtidas com os fixadores utilizados, o fixador de Karnovsky e o glutaraldeído mostraram melhor preservação e maior similaridade na morfologia

Distribuiçäo de componentes de Trypanosoma cruzi e de proteínas miofibrilares do músculo cardíaco em Calomys callosus cronicamente infectados e imunossuprimidos / Distribuition of Trypanosoma cruzi and myofibrillar components in cardiac muscle of Colomy callosus chronically infected and immunosuppressed

Um modelo experimental de reativação da doença de Chagas crônica com um agente imunossupressor foi desenvolvido a fim de se obter informações sobre do ciclo de vida intracelular do Trypanosoma cruzi e o arranjo das miofíbrilas cardíacas, com o propósito de entender melhor o processo de reativação que ocorre no homem. Calomys caffosus cronicamente infectados com as cepas Y e CL de T. cruzi sofreram reagudização quando tratados com ciclofosfamida, um agente imunossupressor. Cortes de 5 - 8 mm de parafina foram processados para microscopia confocal de imunofluorescência. Anticorpos monoclonais (AcM) produzidos contra as formas do T. cruzi foram usados com base em reatividades previamente descritas: AcM 2C2, reage com um epitopo carboidrato em Ssp-4, uma glicoproteína majoritária da superfície dos amastigotas, enquanto AcM 1 D9, 2137, 3139, 4139 identificam epitopos sobre Ssp-4 diferentes do AcM 2C2. Amostras foram coradas com DAPI para visualizar o cinetoplasto e o núcleo dos parasitas. AcM 2C2 apresentou um padrão de fluorescência homogeneamente distribuído sobre a superfície dos amastigotas; AcM 4139 e 3139 apresentaram a mesma distribuição observada em 2C2. Marcação muito fraca e negativa foi observada com AcM 1 D9 e 2137, respectivamente. AcM 3132, que reage com um epitopo nãocarboidrato de formas flageladas e AcM 4135 que também detecta um epitopo nãocarboidrato, revelou a bolsa flagelar em amastigotas alongados e a membrana plasmática dos parasitas que estavam sofrendo divisão. Para observação das proteínas miofibrilares, a técnica de recuperação antigênica foi utilizada nos cortes de parafina. Os cortes foram submetidos a tripla marcação; 1. AcM para visualizar as diferentes proteínas miofibrilares (miosina, actina, desmina, tropomiosina, troponina T, titina e a-actinina) do músculo cardíaco; 2. Soro chagásico humano para marcar a suprefície dos parasitas; 3. DAPI (para marcar DNA) que coram o núcleo das células e cinetoplasto e núcleo dos parasitas. Em paralelo, culturas primárias de cardiomiócitos de Calomys caflosus recémnascidos foram desenvolvidas para obtenção de informações adicionais sobre o arranjo ou desarranjo das miofibrilas durante a proliferação do T cruzi nestas células. Tanto amostras in vivo como in vitro apresentaram regiões com perda de estriação transversal, acúmulo de. marcação e desarranjo das miofibrilas. Ao E microscópio eletrônico de transmissão também foram observados desarranjos das ...(au)

Confocal fluorescence microscopy: a powerful tool in the study of Chagas' disease

A micrcoscopia confocal por varredura a laser vem se tornando extremamente útil na biologia celular e patologia. Com o uso de anticorpos monoclonais, pode ser uma poderosa ferramenta de diagnóstico assim como para estudos detalhados das diferentes formas do Trypanosoma cruzi em vários tecidos infectados

Epidermal nuclear immunoglobulin deposition in connective tissue diseases

Depósitos de imunoglobulinas (Ig) nos núcleos das células epidérmicas foram observados em 45 de 252 biopsias de pele (17,8%). Isto ocorreu em 19% dos casos de lúpus eritematoso sistêmico, 32% de doença mista do tecido conjuntivo, 22% de esclerose sistêmica progressiva, 20% de vasculites cutâneas, 18% de polimiosites, 33 % de síndrome de Sjogren e foi ausente na doença reumatóide. Este fenômeno mostrou ter uma associaçäo significante com a positividade do teste de ENA (anticorpos contra antígeno nuclear extraível), com o padräo pontilhado do FANA (anticorpos imunofluorescentes contra antígeno nuclear) e com anticorpos anti-RNP (fraçäo ribonuclease sensitiva do ENA, designada de ribonucleoproteína). Evidências indiretas de que este fenômeno ocorre verdadeiramente "in vivo" foram observadas porque alguns pacientes com teste de ENA positivo näo apresentaram depósitos de Ig nos núcleos das células epidérmicas e vice-versa; näo constatamos diferenças significantes entre pele fenômeno; nenhuma associaçäo foi observada entre depósito de imunecomplexos na junçäo dermoepidérmica ou vasos dérmicos com aqueles nos núcleos das células epidérmicas